Proteinas

ROTEIRO PARA AULA PRÁTICA

A purificação da proteína de interesse é o primeiro passo, obtendo fragmentos especifico que possam facilmente ser seqüenciado. Observar a precipitação de metaproteína, a identificação de aminoácidos e a quantificação de proteína pelo método espectrômetro (MALDI TOF).

OBJETIVOS

Observar a precipitação de metaproteinas identificar aminoácidos e quantificar proteína.

MATERIAL E MÉTODOS

Na precipitação de metaproteinas utiliza-se tubos de ensaios com 2ml de clara de ovo com 10 gotas de HNO3 , deixar descansar (reação de Heller). Na identificação de aminoácido ensaio colocar 10ml de clara de ovo e mais 10 gotas de HNO3, agitar e ferver depois colocar algumas gotas de N4OH e observar. Para quantificação de proteínas, pegar uma fruta e pesá-la inteira, anotar o valor, pesar 5 gramas de fruta, triturar no almaforiz com 5ml de água gelada (para extrair proteína tem que ser água gelada), filtrá-la com o funil no tubo de ensaio, utilizar outros dois tubos de ensaios e colocar em um 1ml de clara de ovo e no outro 1ml de água, nesses três tubos colocar em cada um 4ml de biureto e deixar repousar por 15 minutos, após o repouso observar no espectrofotômetro (MALDI TOF). Após a leitura esses dados são passados na leitura de curva padrão SAB (soro albumina bovino).

PRECIPITAÇÃO DE METAPROTEÍNA

As proteínas podem ser separadas umas das outras ou de outras moléculas com base em características tais como solubilidade, tamanho, carga elétrica e afinidade de ligação.


IDENTIFICAÇÃO DE AMINOÁCIDOS

A composição de uma proteína em aminoácidos pode ser verificada por sua hidrolise aos aminoácidos. As seqüências de aminoácidos são ricas em informações respeito do parentesco de proteínas de suas relações evolutivas e de doenças produzidas a seqüência fornece dados valiosos da conformação e da função.

QUANTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS

A quantificação de proteínas auxilia na observação de quantidades de proteínas em uma solução estabelecendo uma curva padrão SAB (soro albumina bovina).